Protocolo unificado de digestión y descalcificación de tres métodos de extracción de ADN de restos humanos
PDF

Cómo citar

Sierra, W. U., del Castillo-Sabogal, H., & Espitia-Ortiz, T. (2018). Protocolo unificado de digestión y descalcificación de tres métodos de extracción de ADN de restos humanos. Revista De La Academia Colombiana De Ciencias Exactas, Físicas Y Naturales, 41(161), 447–455. https://doi.org/10.18257/raccefyn.527

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.

Métricas Alternativas


Dimensions

Resumen

La identificación de restos humanos esqueletizados con base en el ADN es un procedimiento muy utilizado en los laboratorios forenses del mundo. Existen al menos tres métodos para la obtención del ADN a partir de este tipo de tejido: mediante solventes orgánicos (fenol-cloroformo), columnas de sílice (QIAquick de QIAgen) y perlas magnéticas recubiertas de polímero (PrepFiler Express™ BTA Forensic DNA Extraction Kit). Cada uno de ellos involucra un procedimiento distinto para la digestión y descalcificación del tejido óseo, así como la aplicación de diferentes principios fisicoquímicos para la purificación y la elución del ADN y el uso de diferentes cantidades iniciales de material pulverizado. Aunque los tres métodos han demostrado ser efectivos dependiendo de la calidad de la muestra, en el Laboratorio de Investigación Genética de Restos Humanos del Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses se estandarizó un protocolo unificado para la digestión y descalcificación, independientemente del método de purificación. Con este fin, se evaluaron variables como la cantidad de material pulverizado, el uso y la concentración de detergentes, la concentración de proteinasa K, el uso de dispositivos concentradores y de los reactivos del estuche PrepFiler Express™ BTA Forensic DNA Extraction y EDTA. El efecto de las variables se evaluó en muestras de tejido calcificado provenientes de los casos forenses del Laboratorio y en el ADN de líneas celulares conocidas analizando la cantidad de ADN recuperado y la calidad del perfil genético. El protocolo unificado de digestión y decalcificación permite una digestión completa del material pulverizado y, por ende, una mejor recuperación de ADN, independientemente del método de purificación usado. En las muestras analizadas el método tuvo un porcentaje de éxito cercano a 80 %. © 2017. Acad. Colomb. Cienc. Ex. Fis. Nat.

https://doi.org/10.18257/raccefyn.527
PDF

Citas

Amory, S., Huel, R., Bilic, A., Loreille, O., Parsons, T. (2012). Automatable full demineralization DNA extraction procedure from degraded skeletal remains. Forensic Science International Genetics. 6: 398-406.

Applied Biosystems by Life Technologies. (2012). AutoMate Express™ Instrument.

Barrio-Caballero, P. (2013). Revisión de métodos de extracción de ADN a partir de restos óseos en el laboratorio forense. Revista Española de Medicina Legal. 39 (2): 54-62.

Bonewald, L. (2011). The Amazing Osteocyte. Journal of Bone and Mineral Research. 26: 229-238.

Brevnov, M., Pawar, H., Mundt, J., Calandro, L., Furtado, M., Shewale, J. (2009). Developmental Validation of the PrepFiler Forensic DNA Extraction Kit for Extraction of Genomic DNA from Biological Samples. Forensic Science. 54: 3.

Campos , P., Craig, O., Turner-Walker, G., Peacock, E., Gilbert, M. (2012). DNA in Ancient Bone – Where is it located and how should we extract it? Annals of Anatomy. 194: 7-16.

Collins, M., Nielsen-Marsh, C., Hiller, J., Smith, C., Roberts, J. (2002). The Survival of Organic Matter in Bone: A Review. Archeometry. 44: 383-394.

Davoren, J., Vanek, D., Crews, J., Huffine, E., Parsons, T. (2007). Highly Effective DNA Extraction Method for Nuclear Short Tandem Repeat Testing of Skeletal Remains from Mass Graves. Croat Med J. 48: 478-485.

Dukes , M., Williams, A., Massey, C., Wojtkiewicz , P. (2012). Technical Note: Bone DNA Extraction and Purification Using Silica-Coated Paramagnetic Beads. American Journal of Physical Anthropology. 148 (3): 473-482.

Edson, S., Ross, J., Coble , M., Parsons, T., Barritt , S. (2004). Naming the Dead Confronting the Realities of Rapid Identification of Degraded Skeletal Remains. Fororensic Science. 16: 64-88.

Frías, I., López-Soto, M., Prieto, V., Torres, Y. (2012). Identificación de ADN en Huesos y Piezas Dentales. Capítulo 2.2. Zaragoza.

Gamba, C., Hanghøj, K., Gaunitz, C., Alfharan, A., Alquraishi, S., Bradley, D., Orlando, L. (2016). Comparing the performance of three ancient DNA extraction methods for high-throughput sequencing. Molecular Ecology Resources.16: 459-69.

Gill, P., Ivanov, P., Kimpton, C., Piercy, R., Benson, N. (1994). Identification of the remains of the Romanov family by DNA analysis. Nature Genetics. 6: 130-136.

Higgins, D. & Austin, J. (2013). Teeth as a source of DNA for forensic identification of human remains: A Review. Science and Justice. 53: 433-441.

Jakubowska, J., Maciejewska, A., Pawłowski, R. (2012). Comparison of three methods of DNA extraction from human bones with different degrees of degradation. International Journal of Legal Medicine. 126: 173-178.

Kitayama, T., Ogawa, Y., Fijii, K., Nakahara, H., Mizuno, N., Sekiguchi, K., Fukushima, H. (2010). Evaluation of a new experimental kit for the extraction of DNA from bones and teeth using a non-powder method. Legal Medicine. 12:84-89.

Kulstein, G., Hadrys, T., Wiegand, P. (2017). As solid as a rockcomparison of CE- and MPS-based analyses of the petrosal bone as a source of DNA for forensic identification of challenging cranial bones. International Journal Of Legal Medicine. doi.org/10.1007/s00414-017-1653-z

Life Technologies Corporation. (2010). PrepFiler Express and PrepFiler Express BTA Forensic DNA Extraction Kits. User Guide.

Liu, J., Zhong, C., Holt, A., Lagace, R., Harrold, M., Dixon, A., Hennessy, L. (2012). AutoMate Express™ forensic DNA extraction system for the extraction of genomic DNA from biological samples. Journal of Forensic Science. 57:1022-30.

Loreille, O., Diegoli, T., Irwin, J., Coble, M., Parsons, T. (2007). High Efficiency DNA Extraction from Bone by Total Demineralization. Forensic Science International Genetics. 1: 191-195.

Miloš, A., Selmanoviæ, A., Smajloviæ, L., Huel, R., Katzmarzyk, C., Rizviæ, A., Parsons, T. (2007). Success Rates of Nuclear Short Tandem Repeat Typing from Different Skeletal Elements. Croat Medicine Journal. 48: 486-93.

Montecinos, B. & Zeni, S. (2009). Marcadores bioquímicos del remodelamiento óseo. Utilidad clínica. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana. 43 (2): 177-193.

Rohland , N. & Hofreiter, M. (2007). Comparison and optimization of ancient DNA extraction. BioTechniques. 42: 343-352.

Rothe, J. & Nagy, M. (2016). Comparison of two silica-based extraction methods for DNA isolation from bones. Legal Medicine: 22: 36-41.

Sambrook, J., Fritsch, E., Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (Vol. 3). NY.

Uzair, A., Rasool, N., Wasim, M. (2017). Evaluation of different methods for DNA extraction from human burnt bones and the generation of genetic profiles for identification. Medicine Science and the Law. 57 (4): 159-166.

Żołędziewska, M., Gronkiewics, S., Dobosz, T. (2002). Comparison of Various Decalcificators in Preparation of DNA From Human Rib Bones Przegląd Antropologiczny. Anthropological Review. 75: 75-80.

Declaración de originalidad y cesión de derechos de autor

Los autores declaran:

  1. Los datos y materiales de referencia publicados han sido debidamente identificados con sus respectivos créditos y han sido incluidos en las notas bibliográficas y citas que así se han identificado y que de ser requerido, cuento con todas las liberaciones y permisos de cualquier material con derechos de autor.
  2. Todo el material presentado está libre de derechos de autor y acepto plena responsabilidad legal por cualquier reclamo legal relacionado con la propiedad intelectual con derechos de autor, exonerando completamente de responsabilidad a la Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales.
  3. Este trabajo es inédito y no será enviado a ninguna otra revista mientras se espera la decisión editorial de esta revista. Declaro que no hay ningún conflicto de intereses en este manuscrito.
  4. En caso de publicación de este artículo, todos los derechos de autor son transferidos a la Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales, por lo que no puede ser reproducido de ninguna forma sin el permiso expreso de la misma.
  5. Mediante este documento, si el artículo es aceptado para publicación por la Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales, la Revista asume el derecho de editar y publicar los artículos en índices o bases de datos nacionales e internacionales para académicos y uso científico en formato papel, electrónico, CD-ROM, internet ya sea del texto completo o cualquier otra forma conocida conocida o por conocer y no comercial, respetando los derechos de los autores.

Transferencia de derechos de autor

En caso de que el artículo sea aprobado para su publicación, el autor principal en representación de sí mismo y sus coautores o el autor principal y sus coautores deberán ceder los derechos de autor del artículo correspondiente a la Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales, excepto en los siguientes casos:

Los autores y coautores se reservan el derecho de revisar, adaptar, preparar trabajos derivados, presentaciones orales y distribución a algunos colegas de reimpresiones de su propio trabajo publicado, si se otorga el crédito correspondiente a la Revista de la Academia Colombiana de Ciencias. Exactas, Físicas y Naturales. También está permitido publicar el título de la obra, resumen, tablas y figuras de la obra en los sitios web correspondientes de los autores o sus empleadores, dando también crédito a la Revista.

Si el trabajo se ha realizado bajo contrato, el empleador del autor tiene el derecho de revisar, adaptar, preparar trabajos derivados, reproducir o distribuir en papel el trabajo publicado, de manera segura y para uso exclusivo de sus empleados.

Si la Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales fuera solicitada por un tercero para el uso, impresión o publicación específica de artículos ya publicados, la Revista debe obtener el permiso expreso del autor y coautores de la trabajo o del empleador excepto para uso en aulas, bibliotecas o reimpreso en un trabajo colectivo. La Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales se reserva el posible uso en su portada de figuras entregadas con los manuscritos.

La Revista de la Academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales no puede reclamar ningún otro derecho que no sea el de autor.